2023年10月10日发(作者：violets)

热原和细菌内毒素

一、热原(progon)

医院临床在使用药品注射剂时，常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、

呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡，这种症状称之热原反应。

为提高药品质量与用药安全，人们对热原进行了广泛的研究，直到1923年

Seibert提出了用家兔检测热原的方法。在1942年美国药典首先将家兔热原检

查项收入药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界

各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。

家兔热原检查法的优点，可在规定时间里观察到家兔的体温变化，相应反应

了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程。因此，在半个多世纪以来热原检

查法，为保障药品质量与用药安全发挥了重要作用。

但随着制药工业的进展与临床用药的要求，该方法的局限性越来越明显。这

种热原检查法，只局限于某种药物进入体内（血循环）是否能引起体温变化或者

热原反应作为推断药品是否污染热原的方法，已不能满足医药工业进展的需要。

其缺点：

①标准化程度低，无法推断检查样品中存在的热原质到底是什么或者是哪一

种物质。

②由于试验动物家兔是处在被细菌污染的环境中，通过吸入或者皮肤感染细

菌内毒素而被免疫，导致动物的个体差异较大。

③试验动物受到药品的药理活性干扰，而影响体温变化（如放射性药品、抗

生素、生物制品等），实验结果难以推断。

④设备及实验费用昂贵（如建设动物房、水电、动物饲料等耗费），做一种

药品需要280元/次，而鲎试剂仅28元/次。

综上情况分析，鲎试验法可避免以上动物热原检查法的不足，该技术的成功

与应用真可谓是药品质量监控一场大革命。

什么是热原？目前国内外仍未有统一的认识，但从国内外文献报道中，一个

共同的意见，都普遍认为：它是指细菌内毒素的脂多糖。

欧洲药典委员会副主席 Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热

原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。在药

品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量操纵通常能够同意的观点

是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。

二、细菌内毒素（Endotoxin）

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（Lipoply Saccharide）

与微量蛋白（Protein）的复合物，它的特殊性不是细菌或者细菌的代谢产物，

而是细菌死亡或者解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。其化学

成分广泛分布于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、

沙门氏菌等）及其它微生物（如衣原体、立克次氏体、螺旋体等）的细胞壁层的

脂多糖，其化学成份要紧是由O-特异性链、核心多糖、类脂A三部分构成。

<一>、O—特异性链：位于脂多糖分子最外层的多糖链，是由3—5个单糖（通

常不多于25个）连成为一个多糖链。其单糖包含戊糖、氨基戊糖、已糖、氨基

已糖、脱氧已糖等，单糖的种类、位置与排列顺序与空间构型，因菌种不一致而

异。因此，它决定菌体热原的特异性。

<二>核心多糖：核心多糖的变异性较小，位于类脂A与0—特异性链（内层）

之间，在结构上分为内核心与外核心。外核心含有数种己糖，包含葡萄糖、半乳

糖、乙酰氨基葡萄糖等构成。内核心含有庚糖及特殊的酮糖（3-脱氧-D-甘露糖-

辛酮糖KDO）。这部分结构对不一致菌株的LPS基本相似，而且KDO是以不耐酸

的酮糖链与类脂A的氨基葡萄糖连接，是构成内毒素脂多糖的核心部分。

<三>类脂A：位于LPS分子结构的外层，是由氨基葡萄糖、磷酸与脂肪酸（10

—18C）构成，故称之为糖磷脂，也是细菌外膜的一种，形成单体聚合物。具有

疏水性（强）与亲水性（弱）的双相性。但是，类脂A可从O-特异链及核心多

糖分离出来，游离的类脂A可自身凝聚成大分子的复合体而难溶于水，并具有生

物活性。因此，类脂A（Lipida）是内毒素多种生物活性或者毒性反应的要紧基

团。该基团没有种属特异性，因此各属细菌的类脂A结构相似，其毒性反应相似。

如发热、血液流淌力学改变、弥漫性血管内凝血，并导致休克等。（附图2）

由于类脂A有4条主链与2条支链的脂肪酸与内酰胺连接构成，因此提纯的

内毒素LPS是极为不稳固的。这就要求内毒素应在低温条件下储存，在工作中内

毒素稀释应尽可能地缩短时间，并要现配现用。

三、内毒素的生物活性与疾病的有关性

据文献报道，在很早期（约19世纪末）的意大利学者Centanne通过菌属自

溶的方法，从革兰氏阴性杆菌中提取出一种类似毒素的物质，由于这种物质对动

物体产生致热活性的同时，亦产生出一种病理学病性反应，而被命名为致热毒素

（Pyrotoxina）。同时由德国的Buchner也从多种细菌中提取到相似的致热毒素，

并证实了这种毒素在导致白细胞数目的改变同时，具有增强机体对细菌感染时的

免疫能力。因此建立了“发热疗法”。

在美国纽约的临床医师，William BColey用加热法杀死录杆菌与化脓性

·

链球菌，将上清滤液用于各类恶性肿瘤（特别是肉瘤）的治疗，取得较好的疗效。

他将这种细菌上清液命名为Coley氏毒素。此后 证实Coley氏

毒素中具有抗肿瘤作用的物质为内毒素。

直到1933年Boivin等学者在研究鼠伤寒杆菌的致病机理时，从鼠伤寒杆菌

中提取出内毒素。在50年代以后，对内毒素的化学成分与化学结构的研究得到

迅速进展。通过大量实验说明，内毒素具有极强的生物学活性，特别是革兰氏阴

性菌感染与静脉注射提取的内毒素溶液时，可导致动物体发生内毒素休克与死

亡。

内毒素的致病机理，要紧是由于革兰氏阴性杆菌（如大肠杆菌、沙门氏杆菌、

伤寒杆菌，布氏杆菌、变形杆菌金黄色葡萄球菌等）与其它微生物（病毒、立克

次氏体、衣原体螺旋体等）感染时，这类菌属随病灶渗液进入血液循环，并扩散

到各类组织器官与体液细胞内繁殖，这类菌属在体内死亡与解体后，才稀放出大

量的细菌内毒素脂多糖（LPS），据初步实验说明，当机体内毒素浓度國值 >

0.005ng/ml时,可诱生内源性热原质如肿瘤坏死因子、白细胞介素与β2—干扰素

等。这些因子刺激体温调节中枢导致机体发热，细菌内毒素直接或者间接作用于

肝脏与胰腺时，可使肝细胞损伤，使糖原异生酶（如葡萄糖—6—6磷酸酶、糖

原合成酶）的活性降低，抑制糖原的异生与分解。同时内毒素作用于胰腺导致胰

腺功能障碍，并形成胰岛素抵抗，造成血糖升高致使并发心肌炎与心肌肿大的系

列高血糖症状。因此，革兰氏阴性菌属感染或者在病灶中的细菌进入体液细胞繁

殖，当其死亡或者解体后产生的内毒素，可多次进入血液，引起反复发作，其病

理变化极为广泛，几乎所有的器官与组织都可被侵犯，而引起各器官的功能障碍。

其中以网状内皮系统最常见，淋巴、脾、肝、肾、骨髓中均有上皮细胞增生，形

成肉芽肿，以肝脏有肉芽肿外，还可发生冲血、水肿与肝细胞坏死，最终导致肝

硬化的发生。其它器官亦有相似的毒性反应。

因此，加强对药品与人体液中的细菌内毒素监测，对确保人体健康具有十分

重要的意义。湛江博康海洋生物有限公司研制的定量鲎试剂与天津大学无线电厂

研制的细菌内毒素检测定系统，为广大医药学科学工作者提供了方便。

2023年10月10日发(作者：violets)

热原和细菌内毒素

一、热原(progon)

医院临床在使用药品注射剂时，常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、

呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡，这种症状称之热原反应。

为提高药品质量与用药安全，人们对热原进行了广泛的研究，直到1923年

Seibert提出了用家兔检测热原的方法。在1942年美国药典首先将家兔热原检

查项收入药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界

各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。

家兔热原检查法的优点，可在规定时间里观察到家兔的体温变化，相应反应

了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程。因此，在半个多世纪以来热原检

查法，为保障药品质量与用药安全发挥了重要作用。

但随着制药工业的进展与临床用药的要求，该方法的局限性越来越明显。这

种热原检查法，只局限于某种药物进入体内（血循环）是否能引起体温变化或者

热原反应作为推断药品是否污染热原的方法，已不能满足医药工业进展的需要。

其缺点：

①标准化程度低，无法推断检查样品中存在的热原质到底是什么或者是哪一

种物质。

②由于试验动物家兔是处在被细菌污染的环境中，通过吸入或者皮肤感染细

菌内毒素而被免疫，导致动物的个体差异较大。

③试验动物受到药品的药理活性干扰，而影响体温变化（如放射性药品、抗

生素、生物制品等），实验结果难以推断。

④设备及实验费用昂贵（如建设动物房、水电、动物饲料等耗费），做一种

药品需要280元/次，而鲎试剂仅28元/次。

综上情况分析，鲎试验法可避免以上动物热原检查法的不足，该技术的成功

与应用真可谓是药品质量监控一场大革命。

什么是热原？目前国内外仍未有统一的认识，但从国内外文献报道中，一个

共同的意见，都普遍认为：它是指细菌内毒素的脂多糖。

欧洲药典委员会副主席 Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热

原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。在药

品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量操纵通常能够同意的观点

是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。

二、细菌内毒素（Endotoxin）

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（Lipoply Saccharide）

与微量蛋白（Protein）的复合物，它的特殊性不是细菌或者细菌的代谢产物，

而是细菌死亡或者解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。其化学

成分广泛分布于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、

沙门氏菌等）及其它微生物（如衣原体、立克次氏体、螺旋体等）的细胞壁层的

脂多糖，其化学成份要紧是由O-特异性链、核心多糖、类脂A三部分构成。

<一>、O—特异性链：位于脂多糖分子最外层的多糖链，是由3—5个单糖（通

常不多于25个）连成为一个多糖链。其单糖包含戊糖、氨基戊糖、已糖、氨基

已糖、脱氧已糖等，单糖的种类、位置与排列顺序与空间构型，因菌种不一致而

异。因此，它决定菌体热原的特异性。

<二>核心多糖：核心多糖的变异性较小，位于类脂A与0—特异性链（内层）

之间，在结构上分为内核心与外核心。外核心含有数种己糖，包含葡萄糖、半乳

糖、乙酰氨基葡萄糖等构成。内核心含有庚糖及特殊的酮糖（3-脱氧-D-甘露糖-

辛酮糖KDO）。这部分结构对不一致菌株的LPS基本相似，而且KDO是以不耐酸

的酮糖链与类脂A的氨基葡萄糖连接，是构成内毒素脂多糖的核心部分。

<三>类脂A：位于LPS分子结构的外层，是由氨基葡萄糖、磷酸与脂肪酸（10

—18C）构成，故称之为糖磷脂，也是细菌外膜的一种，形成单体聚合物。具有

疏水性（强）与亲水性（弱）的双相性。但是，类脂A可从O-特异链及核心多

糖分离出来，游离的类脂A可自身凝聚成大分子的复合体而难溶于水，并具有生

物活性。因此，类脂A（Lipida）是内毒素多种生物活性或者毒性反应的要紧基

团。该基团没有种属特异性，因此各属细菌的类脂A结构相似，其毒性反应相似。

如发热、血液流淌力学改变、弥漫性血管内凝血，并导致休克等。（附图2）

由于类脂A有4条主链与2条支链的脂肪酸与内酰胺连接构成，因此提纯的

内毒素LPS是极为不稳固的。这就要求内毒素应在低温条件下储存，在工作中内

毒素稀释应尽可能地缩短时间，并要现配现用。

三、内毒素的生物活性与疾病的有关性

据文献报道，在很早期（约19世纪末）的意大利学者Centanne通过菌属自

溶的方法，从革兰氏阴性杆菌中提取出一种类似毒素的物质，由于这种物质对动

物体产生致热活性的同时，亦产生出一种病理学病性反应，而被命名为致热毒素

（Pyrotoxina）。同时由德国的Buchner也从多种细菌中提取到相似的致热毒素，

并证实了这种毒素在导致白细胞数目的改变同时，具有增强机体对细菌感染时的

免疫能力。因此建立了“发热疗法”。

在美国纽约的临床医师，William BColey用加热法杀死录杆菌与化脓性

·

链球菌，将上清滤液用于各类恶性肿瘤（特别是肉瘤）的治疗，取得较好的疗效。

他将这种细菌上清液命名为Coley氏毒素。此后 证实Coley氏

毒素中具有抗肿瘤作用的物质为内毒素。

直到1933年Boivin等学者在研究鼠伤寒杆菌的致病机理时，从鼠伤寒杆菌

中提取出内毒素。在50年代以后，对内毒素的化学成分与化学结构的研究得到

迅速进展。通过大量实验说明，内毒素具有极强的生物学活性，特别是革兰氏阴

性菌感染与静脉注射提取的内毒素溶液时，可导致动物体发生内毒素休克与死

亡。

内毒素的致病机理，要紧是由于革兰氏阴性杆菌（如大肠杆菌、沙门氏杆菌、

伤寒杆菌，布氏杆菌、变形杆菌金黄色葡萄球菌等）与其它微生物（病毒、立克

次氏体、衣原体螺旋体等）感染时，这类菌属随病灶渗液进入血液循环，并扩散

到各类组织器官与体液细胞内繁殖，这类菌属在体内死亡与解体后，才稀放出大

量的细菌内毒素脂多糖（LPS），据初步实验说明，当机体内毒素浓度國值 >

0.005ng/ml时,可诱生内源性热原质如肿瘤坏死因子、白细胞介素与β2—干扰素

等。这些因子刺激体温调节中枢导致机体发热，细菌内毒素直接或者间接作用于

肝脏与胰腺时，可使肝细胞损伤，使糖原异生酶（如葡萄糖—6—6磷酸酶、糖

原合成酶）的活性降低，抑制糖原的异生与分解。同时内毒素作用于胰腺导致胰

腺功能障碍，并形成胰岛素抵抗，造成血糖升高致使并发心肌炎与心肌肿大的系

列高血糖症状。因此，革兰氏阴性菌属感染或者在病灶中的细菌进入体液细胞繁

殖，当其死亡或者解体后产生的内毒素，可多次进入血液，引起反复发作，其病

理变化极为广泛，几乎所有的器官与组织都可被侵犯，而引起各器官的功能障碍。

其中以网状内皮系统最常见，淋巴、脾、肝、肾、骨髓中均有上皮细胞增生，形

成肉芽肿，以肝脏有肉芽肿外，还可发生冲血、水肿与肝细胞坏死，最终导致肝

硬化的发生。其它器官亦有相似的毒性反应。

因此，加强对药品与人体液中的细菌内毒素监测，对确保人体健康具有十分

重要的意义。湛江博康海洋生物有限公司研制的定量鲎试剂与天津大学无线电厂

研制的细菌内毒素检测定系统，为广大医药学科学工作者提供了方便。